| 抄録 |
［背景・目的］膵臓のランゲルハンス島の研究は，生活習慣病の解明に直結する重要な研究課題の一つである．今回，ラット膵ランゲルハンス島からの純度の高いRNAの抽出法を開発したので報告する．［方法］10-12週齢の雄SDラットを用いて総胆管を同定し，Liberase TL（Roche Diagnostics GmbH, Mannheim, Germany）を含むKyoto solution（ETK；Ostuka Pharmaceutical, Tokyo, Japan）を注入し，膵臓を切除し，37℃で30分間，Liberase TLを用いて消化した．消化した膵臓の組織を遠心分離し（4℃，270xg 2分間），400μmのmeshで消化されていない組織，脂肪組織，リンパ球等を取り除いた．ETK/OptiPrep溶液（60％（w/v）iodixanol solituon（密度媒体）；Axis-Shield, Oslo, Norway）を用いて，25％，23％，20％，11％のiodixanol勾配を用いて遠心分離し（1000xg 15分間），20％と11％勾配の間にランゲルハンス島を分離した．ランゲルハンス島を10％FBS入りのHanks液で洗浄し，再び遠心分離した（4℃，420xg 2分間）．ランゲルハンス島を，Hanks液で再懸濁後，100μmのcellstrainer（BD Biosciences, California, USA）で回収した．RNAは，RNeasy Mini Kit（QIAGEN GmbH, Hilden, Germany）で抽出した．［成績］Reverse transcriptionは不純物の混入に対して感受性が高く，高純度のRNAの抽出の一つの目安となる．cDNA産生物をアガロース電気泳動で流した時，0.1kbから＞4kbにcDNA産生物が認められた場合，純度の高いRNAの抽出に成功したことが知られている．［結論］今回，開発した方法により，純度の高いRNAの抽出を行うことにより，膵臓のランゲルハンス島だけからの高率的なcDNA Microarray法やReal-time PCRを施行することができ，生活習慣と消化器疾患の解明の一手段が確立できるものと確信する． |
