| 抄録 |
【目的】本研究では，NASH/NAFLDモデルマウスを用いて，発癌過程での肝組織における酸化損傷を解析し，さらにDNA酸化損傷がエピゲノム変異を誘導しうるかを検討した．【方法】（1）FLSマウスを用い，肝組織および発生した肝癌組織の酸化ストレスによる損傷を，8-OHdG，HNE，チオレドキシン（Trx）染色で評価した．（2）HepG2及び胎児由来肝細胞（Hc細胞）をH2O2処理し，処理前後の癌抑制遺伝子（TSG）プロモーター領域でのヒストン修飾変化を，活性型ヒストン修飾マーカーであるtrimethyl-H3K4（3MeK4H3）及びacethylated-H4K16（AcK16H4）抗体，抑制型ヒストン修飾マーカーのtrimethyl-H3K27（MeK27H3）抗体，及び8-OHdG抗体を用いて免疫沈降（ChIP）し，30種のTSGプロモーターの沈降量を定量的PCR（qPCR）にて評価した．【成績】（1）FLSマウス肝では，生後2ヶ月目より脂肪化の出現とともに8-OHdG陽性細胞が出現し，4ヶ月目よりHNE，Trx陽性細胞が出現した．その後，脂肪化の進展に伴い，8-OHdG，HNE，Trxの染色強度が増加し，癌が発生する12週以降で最大となった．（2）H2O2処理前後の，各抗体を用いたChIP後でのTSGプロモーター沈降量の増加率（fold change）の中央値は，AcK16H4では0.70，3MeK4H3で0.80，3MeK27H3で1.60，8-OHdGでは1.45であった．すなわちH2O2処理後，TSGでの8-OHdG量は増加するとともに，抑制型ヒストン修飾が増加し，活性型ヒストン修飾は減少した．さらに，H2O2で処理前後の，8-OHdG抗体によるChIP後での沈降量のfold changeは，3MeK4H3抗体でのChIPによるfold changeと負に相関し（r＝－0.5273，p＝0.0039），一方，8-OHdGと抑制型ヒストン修飾3MeK27H3のfold changeは正の相関を示した（r＝0.7605，p＜0.0001）．【結論】FLSマウスでは，肝脂肪化に伴って，酸化ストレスによる組織損傷が増加する．またDNA酸化により8-OHdGが生じた場合，そのDNA領域のヒストン修飾は促進型から抑制型に変化した．肝脂肪化はDNA酸化損傷を介して，エピゲノム変異を誘発させる可能性が考えられる． |
